精子欠損精巣切片における異なる発現遺伝子の同定

 

 

RNA配列決定（RNA-Seq）により、転写異常精子の精巣組織における発現量の異なる転写産物を定量し、フィルターされた発現量の異なる遺伝子（DEG）を明らかにした。 精巣生検において、選択された10個のDEGをqRT-PCRにより検証し、2つのタンパク質の局在を決定した。精子の形態と機能を制御する新たな遺伝子が同定された。

 

解析の結果、ヒトの精子形成に大きく関連する6つの遺伝子（SPATA31E1、TEKT3、SLC9C1、PDE4A、CFAP47、TNC）が明らかになった。

 

精巣切片における2つのタンパク質、ORAI1とSPATA31E1の免疫組織化学的局在性から、発育中のヒト生殖細胞における発現が確認され、SPATA31E1は進行した精原細胞と精母細胞で有意に発現していた。

 

この研究では、ヒト生殖細胞に影響を及ぼす遺伝子と関連タンパク質を同定している。 

 

 

 

精子形成不全のヒト精巣生検における発現差遺伝子の同定

方法

正常な精子形成、精子停止、およびセルトリ細胞のみの表現型というよく特徴付けられた表現型を持つ男性からヒト精巣生検を採取し、転写の違いをRNA配列決定（RNA-Seq）によって定量化した。RNA-シーケンス（RNA-Seq）により、表現型、転写の違いを定量化した。 示差的発現遺伝子（DEG）は、精子における優勢な発現と、精子の形態および運動性に関連する遺伝子機能注釈に基づいてフィルタリングした。精子における優勢な発現と、精子の形態と運動性に関連する遺伝子機能注釈に基づいて、示差的発現遺伝子（DEGs）をフィルタリングした。 選択した10個のDEGsをqRT-PCRで検証し、精巣生検で2つのタンパク質の局在を決定した。

 

結果

解析の結果、6つの遺伝子（SPATA31E1、TEKT3、SLC9C1、PDE4A、CFAP47、TNC）が、発育期に濃縮される新規遺伝子の優れた候補であることが明らかになった。精巣生検における2つのタンパク質、ORAI1とSPATA31E1の免疫組織化学的局在性から、両者とも発育中のヒト生殖細胞で発現していることが検証された。精巣生検における2つのタンパク質、ORAI1とSPATA31E1の免疫組織化学的局在は、SPATA31E1が後期精母細胞および精母細胞に濃縮されていることで、両者が発達中のヒト生殖細胞に発現していることを確認した。